一：
構(gòu)建質(zhì)粒載體技術(shù)百科
問(wèn)題1：構(gòu)建質(zhì)粒表達(dá)載體為什么要先連T載再連pmv261?
答：更重要的是，T載體往往設(shè)計(jì)了藍(lán)白斑篩選的功能，插入片段的載體會(huì)呈現(xiàn)白色，這樣也容易區(qū)分驗(yàn)證，不用每個(gè)單菌落都拿去做colonyPCR或提質(zhì)粒酶切驗(yàn)證。當(dāng)然也不是絕對(duì)的，我們實(shí)驗(yàn)室就經(jīng)常直接把片段酶切后連接表達(dá)載體，不。
問(wèn)題2：什么是構(gòu)建載體?
構(gòu)建質(zhì)粒載體答：基因表達(dá)載體的構(gòu)建（即目的基因與運(yùn)載體結(jié)合）是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。將目的基因與運(yùn)載體結(jié)合的過(guò)程，實(shí)際上是不同來(lái)源的DNA重新組合的過(guò)程。如果以質(zhì)粒作為運(yùn)載體，首先要用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使。
問(wèn)題3：shRNA質(zhì)粒載體的構(gòu)建?
答：結(jié)果雙酶切顯示shRNA編碼序列被成功插入pGenesil-1質(zhì)粒中,測(cè)序結(jié)果證實(shí)插入片斷與設(shè)計(jì)序列完全一致。結(jié)論所設(shè)計(jì)的shRNA編碼序列被正確插入質(zhì)粒骨架,成功構(gòu)建了BRAF基因序列特異性的shRNA質(zhì)粒載體。參考網(wǎng)址onhttp://wwwbio。
問(wèn)題4：7基因工程載體
答：質(zhì)粒構(gòu)建原則1、選擇合適的出發(fā)質(zhì)粒:Ori、選擇標(biāo)記、MCS2、正確獲得構(gòu)建質(zhì)粒載體的元件:酶切、PCR3、組裝合適的選擇標(biāo)記基因4、選擇合適的啟動(dòng)子5、提高外源DNA的容量滅活一些有害基因,比如與質(zhì)粒移動(dòng)有關(guān)的基因,或影響質(zhì)粒復(fù)制的負(fù)調(diào)控。
問(wèn)題5：質(zhì)粒的質(zhì)粒載體
答：質(zhì)粒還帶有某些遺傳信息，所以會(huì)賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀。其自我復(fù)制能力及所攜帶的遺傳信息在重組DNA操作，如擴(kuò)增、篩選過(guò)程中都是極為有用的。質(zhì)粒載體是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上為適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室操作而進(jìn)行人工構(gòu)建的。與天然質(zhì)粒。
問(wèn)題6：質(zhì)粒的構(gòu)建過(guò)程
答：插入10kb片段,構(gòu)建500萬(wàn)個(gè)克隆,對(duì)克隆兩端的500bp測(cè)序,得到50億個(gè)堿基序列第三層次是用多拷貝質(zhì)粒作載體,插入2kb片段,計(jì)劃構(gòu)建3000萬(wàn)個(gè)克隆,再對(duì)每個(gè)克隆的500個(gè)堿基直接測(cè)序,可獲得300億個(gè)堿基序列。
問(wèn)題7：什么是質(zhì)?？寺≥d體?
答：多數(shù)在10kb左右。在許多細(xì)菌、乳酸桿菌、藍(lán)藻、酵母等生物中均發(fā)現(xiàn)含有質(zhì)粒，并構(gòu)建了相應(yīng)的質(zhì)粒載體。質(zhì)粒載體是以質(zhì)粒DNA分子為基礎(chǔ)構(gòu)建而成的克隆載體，含有質(zhì)粒的復(fù)制起始位點(diǎn)，能夠按質(zhì)粒復(fù)制的形式進(jìn)行復(fù)制。
問(wèn)題8：什么是構(gòu)建載體?
答：構(gòu)建載體是基因工程的一個(gè)概念有：目的基因，啟動(dòng)子，終止子，標(biāo)記基因，復(fù)制原點(diǎn)主要結(jié)構(gòu)構(gòu)成便于目的基因轉(zhuǎn)化成功。
問(wèn)題9：質(zhì)粒載體的種類(lèi)有哪些啊?
構(gòu)建質(zhì)粒載體答：在基因工程中，常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體。人工構(gòu)建的質(zhì)?？梢约喾N有用的特征于一體，如含多種單一酶切位點(diǎn)、抗生素耐藥性等。常用的人工質(zhì)粒運(yùn)載體有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四環(huán)素基因(Tcr)和抗氨芐青霉素基因(Apr。
問(wèn)題10：LacZ基因通常用于構(gòu)建質(zhì)粒載體的目的是什么?
答：通常構(gòu)造基日載體的目的是便于。與細(xì)胞內(nèi)的好吃酒喝。
二：
構(gòu)建質(zhì)粒載體技術(shù)資料
問(wèn)題1：在基因表達(dá)構(gòu)建載體中什么切割質(zhì)粒什么切割目的基因,為什么?
構(gòu)建質(zhì)粒載體答：用連接酶像膠水一樣,吧質(zhì)粒的兩端和目的片段的兩端連接起來(lái)——又成一個(gè)圓圈了,但是這次這個(gè)DNA圓圈已經(jīng)含有你要的片段了由于載體質(zhì)粒只有圓圈狀才有活性,才有用,所以你必須這么做。
問(wèn)題2：質(zhì)粒載體的四個(gè)基本特征
答：一、質(zhì)粒載體的四個(gè)基本特征1、質(zhì)粒載體具有獨(dú)立復(fù)制的能力。2、質(zhì)粒載體具有選擇標(biāo)記。3、質(zhì)粒載體具有獨(dú)特的酶切位點(diǎn)。4、質(zhì)粒載體能夠轉(zhuǎn)化但是不擴(kuò)散。二、質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外的DNA分子，存在于細(xì)胞質(zhì)中。
問(wèn)題3：如何構(gòu)建一個(gè)基因的過(guò)表達(dá)載體
答：當(dāng)拿到一個(gè)基因的DNA片段后，就需要把它導(dǎo)入一個(gè)載體，一方面長(zhǎng)期保存。另一方面也需要以載體為媒介將基因?qū)胧荏w細(xì)胞中?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。常用的載體有細(xì)菌質(zhì)粒，噬菌體和動(dòng)植物病毒。其中質(zhì)粒載體最常用。
問(wèn)題4：為什么質(zhì)粒不適合構(gòu)建動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體?
答：真核細(xì)胞表達(dá)載體與原核細(xì)胞表達(dá)載體啟動(dòng)子,終止子,復(fù)制子都是不同的,也就是說(shuō)它們所需的表達(dá)元件不同質(zhì)粒帶有原核表達(dá)元件可以在在原核生物內(nèi)表達(dá),但是不適合在真核生物表達(dá)。
問(wèn)題5：構(gòu)建沉默mirna的質(zhì)粒用什么載體
構(gòu)建質(zhì)粒載體答：有三種形式的載體構(gòu)建方式：以pri-miRNA形式構(gòu)建，以pre-miRNA形式構(gòu)建，以mature-miRNA形式構(gòu)建。其中以pre-miRNA形式構(gòu)建的方法應(yīng)用最早也最廣泛。pre-miRNA大約70bp,因?yàn)橐纬汕o環(huán)結(jié)構(gòu)，必須構(gòu)建在含有H1或者U6啟動(dòng)子的載體。
問(wèn)題6：ecoli的pbr322質(zhì)粒在基因工程中有何重要性
答：質(zhì)粒載體pBR322的第四個(gè)優(yōu)點(diǎn)是具有較高的拷貝數(shù)，經(jīng)過(guò)氯霉素?cái)U(kuò)增以后，每個(gè)細(xì)胞中可累積1000-3000份拷貝，該特性為重組體DNA的制備提供了極大的方便。同時(shí)，由于其為人工構(gòu)建質(zhì)粒，雖然帶有抗藥性基因，但已不能在自然界的宿主。
問(wèn)題7：說(shuō)明什么是噬菌體質(zhì)粒,構(gòu)建該載體的原理及用途
構(gòu)建質(zhì)粒載體答：有一半是必需的，與自身的活動(dòng)有關(guān)；其他約1/3是非必需基因。λ噬菌體載體的優(yōu)點(diǎn)比一般質(zhì)粒載體容量大的多，可達(dá)20kb；體外包裝反應(yīng)效力高，通常比質(zhì)粒載體克隆效率高100倍，適于構(gòu)建cDNA文庫(kù)和真核生物基因組文庫(kù)。
問(wèn)題8：質(zhì)粒載體的構(gòu)建的標(biāo)簽是怎么設(shè)計(jì)的
答：根據(jù)你接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)來(lái)設(shè)計(jì)～標(biāo)簽一般gsthis等～gst能有效增加蛋白溶解度用于純化～同時(shí)可以用標(biāo)簽抗體檢測(cè)你的融合蛋白～設(shè)計(jì)標(biāo)簽的位置要根據(jù)蛋白構(gòu)想來(lái)～不影響你的蛋白功能～活性位點(diǎn)N端信號(hào)肽等等～選擇在蛋白的N端C端。
問(wèn)題9：小麥抗病基因?qū)氲耐緩接心男?br/>構(gòu)建質(zhì)粒載體答：第一，通常使用農(nóng)桿菌質(zhì)粒載體構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體，將構(gòu)建好的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)移進(jìn)入農(nóng)桿菌，最后用用農(nóng)桿菌侵染小麥愈傷組織或者細(xì)胞。第二，農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是否轉(zhuǎn)化成功，待形成轉(zhuǎn)基因植株，提取植株進(jìn)行轉(zhuǎn)基因驗(yàn)證。
問(wèn)題10：質(zhì)粒構(gòu)建的載體在基因工程中如何向下遺傳,之后如何DNA檢測(cè),不是說(shuō)提
答：如何遺傳？重組質(zhì)粒，即基因載體。是一個(gè)復(fù)制子，在細(xì)胞內(nèi)可以自主復(fù)制，細(xì)胞分裂時(shí)，質(zhì)粒隨機(jī)分配進(jìn)入子細(xì)胞，類(lèi)似細(xì)胞質(zhì)的母性遺傳（如線粒體、葉綠體等）。如何檢測(cè)？質(zhì)粒的檢測(cè)因質(zhì)粒性質(zhì)不同而不同，一般人工質(zhì)粒有抗性。
三 ：