一：
質(zhì)粒載體構(gòu)建技術(shù)百科
問(wèn)題1：重組質(zhì)粒的構(gòu)建步驟是(重組質(zhì)粒的構(gòu)建步驟)
質(zhì)粒載體構(gòu)建答：您好,我就為大家解答關(guān)于重組質(zhì)粒的構(gòu)建步驟是，重組質(zhì)粒的構(gòu)建步驟相信很多小伙伴還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！1、目的基因是以生物基因組DNA為模板，設(shè)計(jì)引物，PCR出來(lái)的。2、目的產(chǎn)物的序列正確后，就可以構(gòu)建重組載體。
問(wèn)題2：質(zhì)粒是如何構(gòu)建的?
答：插入10kb片段,構(gòu)建500萬(wàn)個(gè)克隆,對(duì)克隆兩端的500bp測(cè)序,得到50億個(gè)堿基序列第三層次是用多拷貝質(zhì)粒作載體,插入2kb片段,計(jì)劃構(gòu)建3000萬(wàn)個(gè)克隆,再對(duì)每個(gè)克隆的500個(gè)堿基直接測(cè)序,可獲得300億個(gè)堿基序列。
問(wèn)題3：發(fā)根致瘤土壤桿菌Ri質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)化載體是怎樣構(gòu)建的?
答：Ri質(zhì)粒具有3個(gè)功能區(qū)域，即致病區(qū)（Vir區(qū)）、轉(zhuǎn)移進(jìn)入植物細(xì)胞核的T-DNA區(qū)和復(fù)制起點(diǎn)（ori）。Ri質(zhì)粒的T-DNA區(qū)上的基因不影響植株再生，野生型Ri質(zhì)?？芍苯佑米鬓D(zhuǎn)化載體。Ri質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)化載體構(gòu)建程序包括中間載體構(gòu)建、中間。
問(wèn)題4：7基因工程載體
答：天然質(zhì)粒的局限性天然存在的野生型質(zhì)粒由于分子量大、拷貝數(shù)低、單一酶切位點(diǎn)少、遺傳標(biāo)記不理想等缺陷,不能滿足克隆載體的要求,因此往往需要以多種野生型質(zhì)粒為基礎(chǔ)進(jìn)行人工構(gòu)建。質(zhì)粒載體的命名原則人工組建的質(zhì)粒人工組建的質(zhì)粒的第一。
問(wèn)題5：簡(jiǎn)述質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和用途
質(zhì)粒載體構(gòu)建答：把一個(gè)有用的目的DNA片段通過(guò)重組DNA技術(shù)，送進(jìn)受體細(xì)胞中去進(jìn)行繁殖和表達(dá)的工具叫載體(Vector)。細(xì)菌質(zhì)粒是重組DNA技術(shù)中常用的載體。質(zhì)粒載體是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上為適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室操作而進(jìn)行人工構(gòu)建的。與天然質(zhì)粒相比，質(zhì)粒。
問(wèn)題6：構(gòu)建載體連接時(shí)間最短多長(zhǎng)
質(zhì)粒載體構(gòu)建答：30分鐘載體構(gòu)建(vectorconstruction)，為把DNA分子運(yùn)送到受體細(xì)胞中去，必須尋找一種能進(jìn)入細(xì)胞、在裝載了外來(lái)的DNA片段后仍能照樣復(fù)制的運(yùn)載體。理想的運(yùn)載體是質(zhì)粒(plasmid)，在基因工程中，常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體。載體。
問(wèn)題7：構(gòu)建質(zhì)粒表達(dá)載體為什么要先連T載再連pmv261?
答：更重要的是，T載體往往設(shè)計(jì)了藍(lán)白斑篩選的功能，插入片段的載體會(huì)呈現(xiàn)白色，這樣也容易區(qū)分驗(yàn)證，不用每個(gè)單菌落都拿去做colonyPCR或提質(zhì)粒酶切驗(yàn)證。當(dāng)然也不是絕對(duì)的，我們實(shí)驗(yàn)室就經(jīng)常直接把片段酶切后連接表達(dá)載體，不。
問(wèn)題8：什么是構(gòu)建載體?
答：構(gòu)建載體是基因工程的一個(gè)概念有：目的基因，啟動(dòng)子，終止子，標(biāo)記基因，復(fù)制原點(diǎn)主要結(jié)構(gòu)構(gòu)成便于目的基因轉(zhuǎn)化成功。
問(wèn)題9：如何進(jìn)行植物基因工程中的載體構(gòu)建
質(zhì)粒載體構(gòu)建答：基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程：1、目的基因的獲?。?）目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。（2）獲取方法：①?gòu)幕蛭膸?kù)中獲?。虎谌斯ず铣桑ǚ崔D(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法）；③PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建（1）。
問(wèn)題10：質(zhì)粒載體的四個(gè)基本特征
答：一、質(zhì)粒載體的四個(gè)基本特征1、質(zhì)粒載體具有獨(dú)立復(fù)制的能力。2、質(zhì)粒載體具有選擇標(biāo)記。3、質(zhì)粒載體具有獨(dú)特的酶切位點(diǎn)。4、質(zhì)粒載體能夠轉(zhuǎn)化但是不擴(kuò)散。二、質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外的DNA分子，存在于細(xì)胞質(zhì)中。
二：
質(zhì)粒載體構(gòu)建技術(shù)資料
問(wèn)題1：質(zhì)粒載體的構(gòu)建的標(biāo)簽是怎么設(shè)計(jì)的
答：根據(jù)你接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)來(lái)設(shè)計(jì)～標(biāo)簽一般gsthis等～gst能有效增加蛋白溶解度用于純化～同時(shí)可以用標(biāo)簽抗體檢測(cè)你的融合蛋白～設(shè)計(jì)標(biāo)簽的位置要根據(jù)蛋白構(gòu)想來(lái)～不影響你的蛋白功能～活性位點(diǎn)N端信號(hào)肽等等～選擇在蛋白的N端C端。
問(wèn)題2：dominantnegative質(zhì)粒是什么如何構(gòu)建
答：獲得目的基因后一般需要將目的基因連接到質(zhì)粒載體上，在引物上加酶切位點(diǎn)可以使后續(xù)的連接過(guò)程簡(jiǎn)單、可控。因?yàn)榭稍谳d體和目的基因上酶切產(chǎn)生相同的切口。也有不需要加酶切位點(diǎn)的T載體，但連接過(guò)程效率不高還會(huì)有反向的錯(cuò)誤。
問(wèn)題3：質(zhì)粒載體的種類有哪些啊?
質(zhì)粒載體構(gòu)建答：在基因工程中，常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體。人工構(gòu)建的質(zhì)?？梢约喾N有用的特征于一體，如含多種單一酶切位點(diǎn)、抗生素耐藥性等。常用的人工質(zhì)粒運(yùn)載體有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四環(huán)素基因(Tcr)和抗氨芐青霉素基因(Apr。
問(wèn)題4：質(zhì)粒載體,噬菌體載體和cosmid質(zhì)粒載體各有何優(yōu)缺點(diǎn)
答：1、質(zhì)粒載體：優(yōu)點(diǎn)：質(zhì)粒載體通常帶有一個(gè)或一個(gè)以上的選擇性標(biāo)記基因（如抗生素抗性基因）和一個(gè)人工合成的含有多個(gè)限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量盡可能減少，以便于基因工程操作。
問(wèn)題5：如何構(gòu)建一個(gè)基因的過(guò)表達(dá)載體
答：當(dāng)拿到一個(gè)基因的DNA片段后，就需要把它導(dǎo)入一個(gè)載體，一方面長(zhǎng)期保存。另一方面也需要以載體為媒介將基因?qū)胧荏w細(xì)胞中?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。常用的載體有細(xì)菌質(zhì)粒，噬菌體和動(dòng)植物病毒。其中質(zhì)粒載體最常用。
問(wèn)題6：轉(zhuǎn)基因醫(yī)療中常用的載體主要有哪些
質(zhì)粒載體構(gòu)建答：3、病毒載體質(zhì)粒和噬菌體載體只能在細(xì)菌中繁殖，不能滿足真核DNA重組需要。感染動(dòng)物的病毒可改造用作動(dòng)物細(xì)胞的載體。由于動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)和操作較復(fù)雜、花費(fèi)也較多，因而病毒載體構(gòu)建時(shí)一般都把細(xì)菌質(zhì)粒復(fù)制起始序列放置其中。
問(wèn)題7：植物表達(dá)載體構(gòu)建的全過(guò)程?
質(zhì)粒載體構(gòu)建答：通過(guò)序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，目的基因與GenBank中已發(fā)表的基因序列完全一致，表明植物表達(dá)載體pBI121�hIL�12構(gòu)建成功23轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的PCR檢測(cè)從三親融合后的農(nóng)桿菌中提取mini�Ti質(zhì)粒，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增。
問(wèn)題8：質(zhì)粒提取的注意事項(xiàng)
答：質(zhì)粒小提主要用于用于大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的小量提取，獲得的質(zhì)?？梢杂糜诔Ｒ?guī)的載體構(gòu)建，一般適用于5ml以下菌液。而質(zhì)粒中提，在小提的基礎(chǔ)上可以進(jìn)一步去除菌液中的內(nèi)毒素，獲得的質(zhì)粒可以用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，常規(guī)需要菌液量為10。
問(wèn)題9：我已經(jīng)有含有目的基因的T質(zhì)粒了,怎樣構(gòu)建表達(dá)載體啊?謝謝
答：你好！選擇合適的表達(dá)載體，選擇兩種酶同時(shí)酶切T質(zhì)粒和表達(dá)載體，將酶切后的片段回收，再連接就可以了。希望對(duì)你有所幫助，望采納。
問(wèn)題10：構(gòu)建沉默mirna的質(zhì)粒用什么載體
答：有三種形式的載體構(gòu)建方式：以pri-miRNA形式構(gòu)建，以pre-miRNA形式構(gòu)建，以mature-miRNA形式構(gòu)建。其中以pre-miRNA形式構(gòu)建的方法應(yīng)用最早也最廣泛。pre-miRNA大約70bp,因?yàn)橐纬汕o環(huán)結(jié)構(gòu)，必須構(gòu)建在含有H1或者U6啟動(dòng)子的載體。
三 ：